Gpr55 как мишень цитотоксичности раковых клеток
ВВЕДЕНИЕ
По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и Американского онкологического общества на 2018 год общий риск развития рака в возрасте от 0 до 74 лет составляет 20,2% (22,4% у мужчин и 18,2% у женщин соответственно). Всего в 2018 году было диагностировано 18 миллионов новых случаев, наиболее частыми из которых являются рак легких (2,09 миллиона случаев), молочной железы (2,09 миллиона случаев) и простаты (1,28 миллиона случаев) [1].
Последнее обновление ВОЗ, соответствующее 2019 году, по 10 основным причинам смертности от болезней в России показывает, что смертность от рака трахеи, бронхов или легких занимает лидирующие позиции, сразу после ишемической болезни сердца и инсультов. Колоректальный рак также входит в список основных причин смерти [2].
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ3
ВВЕДЕНИЕ5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ8
1.1 Эндоканнабиноиды8
1.2 Эндоканнабиноидная система14
1.3 GPR55: физиологические и патологические функции, экспрессия и сигнальные пути18
1.4 Антипролиферативное действие GPR5525
1.5 Предполагаемые механизмы функциональной селективность GPR5529
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ32
2.1 Культуры клеток32
2.2 ПЦР с обратной транскрипцией32
2.3 Исследование цитотоксичности33
2.4 Оценка про-пролиферативного эффекта34
2.5 Тест на выживаемость клеток (MTT-тест)34
2.6 Статистические процедуры35
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ36
3.1 Экспрессия GPR55 клеточных линиях36
3.2 Цитотоксичность DHA-DA37
3.3 Функциональные тесты с блокаторами GPR55 CID16020046 и каннабидиолом38
3.4 Проверка про-пролиферативного действия LPI40
3.5 Проверка сочетанного действия DHA-DA и LPI на клеточной линии MDA-MB-23141
ЗАКЛЮЧЕНИЕ43
ВЫВОДЫ
Согласно оценке ВОЗ эпидемиологической тенденции пяти ведущих причин смертности с 2016 по 2060 год предполагается, что в следующие четыре десятилетия смертность от рака превысит смертность от ишемической болезни сердца, при этом к 2060 году она увеличится в 2,08 раза (в 1,76 раза — от ишемической болезни сердца). Таким образом, злокачественные новообразования станут основной причиной смертности. во всем мире сразу после 2030 годах [1].
Текущие эпидемиологические данные и, что еще более тревожно, тенденция роста частоты, распространенности и смертности от рака, ожидаемая в ближайшие 40 лет, позволяют предположить, что злокачественные заболевания можно рассматривать как одну из первоочередных проблем общественного здравоохранения. Исходя из вышеизложенного, исследования, направленные на поиск новых мишеней для цитотоксичности раковых клеток, представляются перспективными.
Многие рецепторы, связанные с G-белком (GPCR) связаны с онкогенезом и метастазированием. Неопластические клетки часто нарушают свою нормальную физиологию, чтобы выживать, размножаться, защищаться от иммунной системы, индуцировать ангиогенез и способствовать инвазии и метастазированию, а аномальная экспрессия или мутации многих GPCR связаны с различными видами рака [3].
GPR55 представляет собой рецептор, связанный с G-белком, из неклассического семейства каннабиноидных рецепторов [4]. Большой интерес представляет функциональная селективность рецептора: активация GPR55 с помощью лизофосфатидилинозтола (LPI) приводит к усилению клеточной пролиферации; поэтому, если в опухолях выявляется повышенный уровень экспрессии этого белка, это считается маркером неблагоприятного прогноза развития заболевания [5], в то время как анандамид [6] и ацилдофамины [7] индуцируют апоптоз раковых клеток, хотя эти эффекты были показаны только в клетках крысиной феохромоцитомы PC12 [7] для ацилдофаминов, и на клетки холангиокарциномы (линии Mz-ChA-1, HuCC-T1, CCLP1 и SG231)
Авторы не обнаружили связи с другими факторами, такими как возраст, пол, гистологическая дифференцировка и патологическая стадия, и, таким образом, пришли к выводу, что иммуногистохимическое обнаружение CB1 может служить полезным диагностическим маркером для прогнозирования метастазов в лимфатические узлы и отдаленные органы. У пациентов с колоректальным раком, перенесших хирургическую резекцию, низкий уровень экспрессии рецептора CB1 обнаруживался чаще на стадии IV, чем на стадии I/II или III [63]. Интересно, что у пациентов IV стадии с высокой экспрессией CB1 в опухолях общая выживаемость была значительно хуже, чем у пациентов этой стадии с низкой экспрессией CB1, при этом у пациентов на других стадиях не было обнаружено соответствующих различий.