Определение антибиотиков в продуктах животноводства (молоко) с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии после предварительного сорбционного концентрирования
ВВЕДЕНИЕ
Своевременное обнаружение молочного сырья, содержащего ингибирующие вещества, представляет большой интерес для молокоперерабатывающих предприятий. Присутствие ингибиторов в молоке нарушает биотехнологические процессы переработки молока и наносит значительный экономический ущерб маслодельным и сыродельным заводам, предприятиям, производящим кисломолочные продукты, детское и лечебное питание.
К ингибирующим веществам принадлежат: антибиотики, консервирующие, нейтрализующие вещества; моющие и дезинфицирующие средства; нитраты; тяжелые металлы и др. Основными источниками их появления в молоке являются: лечение коров (антибиотики); кормление животных (пестициды, консерванты, кормовые антибиотики, нитраты, тяжелые металлы и др.); обработка доильного и другого молочного оборудования для поддержания санитарии и гигиены (моюще-дезинфицирующие вещества, нейтрализаторы).
Одним из биологически опасных и часто обнаруживаемых видов загрязнения молока являются антибиотики. Особеннос
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Химическая классификация антибиотиков 7
1.2. Применение антибиотиков для снижения микробиологической обсемененности в продуктах животноводства 17
1.3. Методы определения антибиотиков 26
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 30
2.1. Объекты исследования 30
2.2. Методы исследования 32
2.3 Цеолиты, свойства и использование 34
2.3. Биохимические и физико-механические свойства молока 37
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 41
3.1. Исследование органолептических показателей качества молока 41
3.2. Исследование физико-химических и микробиологических показателей качества молока 43
3.3. Исследование содержания антибиотиков в продуктах переработки животноводства 45
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 49
Список использованной литературы 72
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Дуброва Г.Б. Применение антибиотиков для сохранения пищевых продуктов. М.: Госторгиздат, 1961. 83 с.
2. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Наука, 2004. 528 с.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2012. 1216 с.
4. Синопальников А.И., Андреева И.В., Стецюк О. У. Безопасность макролидных антибиотиков: критический анализ // Кли-ническая медицина. 2012. № 3. С. 23-30.
5. Страчунский Л.С., Козлов С.Н. Макролиды в современной клинической практике. Смоленская государственная медицинская академия. 1998. 512 с.
6. Навашин С.М., Фомина И.П. Справочник по антибиотикам. М.: Медицина., 1974. 416 с.
7. Падейская Е.Н., Яковлев С.В. Антимикробные препараты группы фторхинолонов в клинической практике. М., 1998. 351 с.
8. Яковлев С.В. Новое поколение фторхинолонов - новые возможности лечения внебольничных инфекций дыхательных путей // Антибиотики и химиотерапия. 2001. № 6. С. 38-42.
9. Binda E., Marinetti F., Marcone G.L. Old and New Glycopeptide Antibiotics: Action and Resistance // Antibiotics. 2014. № 3. P. 572¬594.
10. Lovmar M., EhrenbergM. The Mechanism of Action of Macrolides, Lincosamides and Streptogramin B Reveals the Nascent Peptide Exit Path in the Ribosome // Journal of Molecular Biology. 2003. V. 330, № 5. P. 1005-1014.
11. Большая советская энциклопедия / гл. ред. А. М. Прохоров. М.: Советская энциклопедия. 1976. Т. 25.
3. Щетинин Е.В. Полимиксины – новый взгляд на известные антибиотики // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000. Т. 2, № С. 68-73.
12. Кальницкая О.И. Методы определения антибиотиков// Молочная промышленность. 2008. № 6. С. 82-83.
13. Фирсов А.А., Алексеева М.Е., Кулешов С.У. и др. Ципрофлоксацин: ВЭЖХ и микробиологический метод при оценке биоэквивалентности лекарственных форм // Химико-фармацевтический журнал. 1995. №3. С. 24-27.
14. Gustavsson E., Bjurling P., Sternesjo A. Bio¬sensor analysis of penicillin G in milk based on the inhibition of carboxypeptidase activity // Analytica Chimica Acta. 2002. Vol. 468. P. 153-159.
15. Гасимова Н.В., Еремин С.А. Определение хлорамфеникола в молоке методом поляризационного иммуноанализа // Журнал аналитической химии. 2010. Т.65, № 3.С. 261-265.
16. Халдеева Е.В., Медянцева Э.П., Иманаева Н.А., и др. Определение гентамицина с помощью амперометрического иммуно-ферментативного сенсора // Журнал аналитической химии. 2002. Т. 57, № 12. С. 1284-1289.
17. Van E.R.M., Setford S.J., Blankwater Y.I., et al. Detection of gentamicin in milk by immunoassay and flow injection analysis with electro-chemical measurement // Analytica Chimica Acta. 2001. Vol. 429, № 1-3. P. 37-47.
18. Ferguson J.P., Baxter G.A., McEvoy J. D. et al. Detection of streptomycin and dihydrostreptomycin resi
Последняя пробирка не содержит испытуемого субстрата и служит контролем ферментативной активности тест-культуры. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 3-часовую экспозицию тест культуры с испытуемым субстратом. После этого в каждую пробирку вносят растопленный и охлажденный до (45±1)°С мясопептонного агара с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок смешивают и вновь инкубируют в термостате при температуре (37±1)°С в течение 1-2 ч.
При отсутствии в испытуемых пробах антибиотика дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-культур не нарушаются и восстанавливают (т.е. обесцвечивают) в анаэробных условиях метиленовый синий. В контрольной пробирке, где нет испытуемой пробы, также происходит обесцвечивание в течение 1-2 ч наблюдения в термостате при температуре (37±1)°С (контроль ферментатив