Разделение аминокислот в водно-органических подвижных фазах методом тонкослойной хроматографии
Введение
Аминокислоты, как и компоненты белков, участвуют практически во всех процессах, происходящих в клетках, проявляя бесконечное разнообразие функций. При изучении молекулярных механизмов биологических процессов неизбежно изучается один или несколько белков. По количеству белки занимают первое место среди биологических молекул. Они содержатся во всех клетках и в некоторых из них. Существует также очень большое разнообразие белков. Тысячи таких типов молекул можно обнаружить в одной клетке. Кроме того, белки очень разнообразны по биологическим функциям и представляют собой наиболее важные продукты метаболических путей передачи информации. Белки - это молекулярные инструменты для поиска реальных форм генетической информации[1,2].
Ключ к пониманию структуры тысяч различных белков лежит в структуре относительно простых объединяющих звеньев. Для построения всех белков, будь то белки древнейших бактериальных линий или белки современных биологических видов, используется одинаковое
СОДЕРЖАНИЕ
Введение. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Глава 1. Литературный обзор . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
1.1. Общая характеристика метода тонкослойной хроматографии . . . . . . . . . 5
1.1.1. Обращённофазовая ВЭТСХ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
1.1.2. Типы хроматографических пластинок и их подготовка. . . . . . . . . . . . .13
1.1.3. Насыщение хроматографической камеры . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.1.4. Пробоподготовка и нанесение веществ на пластинку . . . . . . . . . . . . . 18
1.1.5. Процесс проявления хроматограммы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
1.2. Типы сорбентов применяемые в тонкослойной хроматографии . . . . . . . 25
1.3. Качественные реакции идентификации аминокислот. . . . . . . . . . . . . . . . 29
1.4. Некоторые свойства аминокислот, входящих в состав белков . . . . . . . . 32
Глава 2. Экспериментальная часть . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
2.1. Реактивы, приборы и необходимое оборудование . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
2.2. Приготовление водно–спиртовых растворов аминокислот и детектирующих реагентов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
2.3. Нанесение образцов растворов аминокислот на ТСХ-пластину и их проявление. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
2.4. Расчет параметров эффективности разделения аминокислот . . . . . . . . . 35
Глава 3. Результаты исследований. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
Заключение. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Список литературы . . . . . . . . . . . . . . .
Список литературы
1. Ю.Бёккер Хроматография. Инструментальная аналитика. – М. «Техносфера», 2021. – 471 с.
2. Долгоносов, А. М. Неспецифическая селективность в проблеме моделирования высокоэффективной хроматографии: моногр. / А.М. Долгоносов. - М.: Либроком, 2019. - 256 c.
3. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты. Пептиды и Белки.-М.: Мир, 2016. -362 с.
4. Ильясова P.P., Майстренко B.M. и др. Определение аминокислот в условиях ТСХ: -Всероссийская конференция "Теория и практика хроматографии. Применение в нефтехимии". -Самара, 2015. -С.65-67.
5. Калашникова О.М., Шаповалова Е.Н., Бархутова Д.Д. и др. Определение аминокислотного состава ТСХ. Вестник МГУ. Химия.-2019, Том 45.-№6.-С. 393-398.
6. Кирхнер. Ю. Тонкослойная хроматография в 2 ч. Кн. 1-М.:Мир, 2021.-652 с.
7. Киселев, А. В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии / А.В. Киселев. - М.: Высшая школа, 2016. - 360 c.
8. Кнорре Д. Г. Биологическая химия /Д. Г. Кнорре, С. Д. Мызина. -М.: Высшая школа, 2021. -479 е.
9. Ларионова Д.А., Штыков С.Н. Разделение и количественное определение биологически активных аминов методом ТСХ: - Всероссийская конференция "Теория и практика хроматографии. Применение в нефтехимии". - Самара, 2015. -С. 126-127.
10. Ленинджер А. Биохимия: молекулярные основы структуры и функций клетки.: Пер. с англ. М. 2020.
11. Малахова И.И. Количественная высокоэффективная тонкослойная хроматография аминокислот: Автореф. дис. канд. хим. наук: 05.11.11 /МГУ им. М.В. Ломоносова, М., 2019. -24 с. -Библиогр.: - С.22-24.
12. Машковский М. Д. Лекарственные средства, т.1,2. -М.: Новая волна, 2020.-544 с.
13. Наточин Ю.В. Введение в нефрологию: руководство для врачей. Под. ред. Ю. В. Наточин, Н. А.Мухин. -М.: Гэотар-Медиа, 2017. -160 с.
14. Нестеренко, П. Высокоэффективная комплексообразовательная хроматография ионов металлов / П. Нестеренко, Ф. Джонс, Б. Полл. - М.: Техносфера, 2019. - 312 c.
15. Рассел, Джесси Хроматография / Джесси Рассел. - М.: Книга по Требованию, 2019. -763c.
16. Сычев, С. Н. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Аналитика, физическая химия, распознавание многокомпонентных систем / С.Н. Сычев, В.А. Гаврилина. - М.: Лань, 2019. - 256 c.
17. Туркова, Я. Аффинная хроматография / Я. Туркова. - М.: Книга по Требованию, 2019. - 472 c.
18. Хенке X., Жидкостная
Поэтому мы можем всерьез говорить о высокоэффективной тонкослойной хроматографии (англ.: HPTLC, High performance thin-layer chromatography).
Обычный формат готовой пластинки для ВЭЖХ составляет 20 сантиметров. Современные отделочные панели отличаются однородностью покрытия, равномерной толщиной, прочностью и высокой плотностью слоя. Такие панели сохраняют неизменное хроматографическое качество в течение определенного времени. Необходимо обратить внимание на тот факт, что разные производители используют разные связующие, что приводит к различным хроматографическим свойствам пластины[21.22].
Оптимальный объем наносимого образца составляет около 0,5 миллилитра (до 2 миллилитров) для обычных пластин с силикагелевым покрытием и от 100 до 200 миллилитров (до 500 миллилитров) для высокопроизводительных пластин. Панели ВЭЖХ при правильном использовании отличаются более высокой разделяемостью и более коротким вр