Оптимизация и валидация аналитической методики определения примесей n-нитрозаминов в фармацевтической субстанции холина альфосцерат
ВВЕДЕНИЕ
N-нитрозамины – это крайне опасные соединения, являющиеся сильнодействующими генотоксическими агентами, а также они классифицируются как вероятные канцерогены для человека. Органами-мишенями, в первую очередь страдающими от нитрозаминового туморогенеза, являются печень и органы желудочно-кишечного тракта, а также почки и легкие.
В связи с тем, что данные соединения могут образовываться в процессе синтеза активной фармацевтической субстанции Холина альфосцерат по причине возможного загрязнения исходного сырья, химико-фармацевтическим предприятием ООО «БИОН» было принято решение о контроле данных веществ с целью поставок в дальнейшем более «чистой» и качественной АФС на рынок. Для этого необходимо было разработать методику контроля, а в данном случае оптимизировать уже имеющуюся, что и было проведено в данной работе.
Цель работы – оптимизация и валидация ВЭЖХ методики определения примесей N-нитрозаминов в фармацевтической субстанции Холина альфосцерат.
Задачи:
Под
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………….. 3
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР……………………………... 4-32
1.1. Хроматография. Сущность метода……………………………. 4-22
1.2. Описание N-нитрозаминов…………………………………….. 22-24
1.3. Источники примесей N-нитрозаминов и их образование при синтезе АФС…………………………………………………………. 24-28
1.4. Механизмы токсического воздействия N-нитрозаминов……. 28-30
1.5. Нормирование примесей N-нитрозаминов…………………… 31-32
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………………………. 32-37
2.1. Объект исследования…………………………………………... 32
2.2. Материалы………………………………………………………. 33-35
2.3. Оборудование…………………………………………………... 35-37
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 38-59
3.1. Пределы определения N-нитрозаминов………………………. 38
3.2. Оптимизация методики………………………………………… 38-43
3.2.1. Выбор длины волны детектирования……………………….. 39-40
3.2.2. Выбор колонки………………………………………………... 40-41
3.2.3. Выбор режима элюирования………………………………… 41-43
3.2.4. Укорочение времени анализа………………………………... 43
3.3. Валидация оптимизированной методики……………………... 43-59
3.3.1. Специфичность……………………………………………….. 43-45
3.3.2. Линейность……………………………………………………. 45-50
3.3.3. Предел количественного определения/предел обнаружения 50-51
3.3.4. Аналитическая область………………………………………. 51-52
3.3.5. Правильность…………………………………………………. 52-53
3.3.6. Сходимость………………………………………………….... 53-55
3.3.7. Внутрилабораторная прецизионность………………………. 55-59
ВЫВОДЫ……………………………………………………………. 60
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ…………………... 61-66
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. ОФС.1.2.1.2.0001.15 Хроматография. МЗ РФ. – XIV изд. – Т. 1. – Москва, 2018 г.
2. EMEA/H/A-5(3)/1490, Nitrosamine impurities in human medicinal products (Assessment report), The Netherlands: European Medicines Agency, 2020.
3. Щетинин П.П., Сенченко С.П., Гордеев К.К. Примеси N-нитрозаминов в лекарственных средствах: токсичность, пути образования, методы определения и нормирование (обзор) // М.: Разработка и регистрация лекарственных средств. – 2020. – Т.9. – №4. – С.180-190.
4. Юргель Н.В. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности. Методические рекомендации // М.: Спорт и Культура-2000. – 2007. – 192 с.
5. Appendix F: Guidelines for Standard Method Performance Requirements.
6. ОФС.1.2.1.2.0005.15 Высокоэффективная жидкостная хроматография. МЗ РФ. – XIV изд. – Т. 1. – Москва, 2018 г.
7. Государственная фармакопея РФ [Электронный ресурс] // М.: Министерство здравоохранения РФ. – 2018. – XIV изд. – Т.1. – С.1814. – https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol1/
8. PI 006-3 Recommendation on Validation Master Plan, Installation and Operational Qualification, Non-sterile Process Validation, Cleaning Validation, PIC/S, 2007.
9. ОФС.1.1.0012.15 Валидация аналитических методик. МЗ РФ. – XIV изд. – Т. 1. – Москва, 2018 г.
10. ОФС.1.1.0013.15 Статистическая обработка результатов химического эксперимента. МЗ РФ. – XIV изд. – Т. 1. – Москва, 2018 г.
11. ОФС.1.1.0023.18 Родственные примеси в фармацевтических субстанциях и лекарственных препаратах. МЗ РФ. – XIV изд. – Т. 1. – Москва, 2018 г.
12. EMA/CHMP/CVMP/SWP/169430/2012, Guideline on setting health based exposure limits for use in risk identification in the manufacture of different medicinal products in shared facilities, Draft, 2012.
13. Приказ Минпромторга России от 14.06.2013 № 916 (ред. от 18.12.2015) Об утверждении Правил надлежащей производственной практики.
14. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения.
15. Адышева Ж.И., Беляев В.В., Береговых В.В. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик // Фармация. – 2008. – №7. – С.9-14.
16. International Conference on Harmonization (ICH). Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology, ICH, Q2(R1), 2005.
17. Решение Совета Евразийской экон
При этом требования к минимальному значению соотношения p/v устанавливаются в фармакопейной статье);– отношение сигнал/шум для пика вещества, полученное для раствора с концентрацией, равной требуемому уровню минимально определяемой концентрации, должно быть не менее 10. Требуемый уровень минимально определяемой концентрации [фактический предел количественного определения (ПКО)] зависит от того, предполагает ли методика вычисление содержания примесей, или только полуколичественную оценку, когда результат представляется в виде «менее Х» или «не более Х», где Х – допустимое содержание примеси. Для методик, предполагающих вычисление содержания примесей, минимальная определяемая концентрация для применяемой хроматографической системы не должна превышать значение порога игнорирования (если не указано иное – 0,05 % относительно к